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【水蜜桃试色app下载攻略】DNA提取秘籍在手,實驗路上不用愁!

來(lai)源:暫(zan)無 瀏覽(lan)量:載(zai)入(ru)中...發(fa)布(bu)時(shi)間(jian):2023.04.04


DNA即脫(tuo)氧核(he)糖核酸(deoxyribonucleic acid),是(shi)一(yi)種生物大(da)分子,存(cun)在(zai)於幾(ji)乎(hu)所(suo)有(you)的(de)原核和真(zhen)核細(xi)胞以(yi)及(ji)部分(fen)病毒中。

DNA於1869年(nian)被發現(xian),但直到1944年才證(zheng)明其(qi)在遺傳中的作(zuo)用。1953年羅莎(sha)琳德(de)·富蘭克(ke)林(lin)(Rosalind Franklin)、詹(zhan)姆斯(si)·沃森(sen)(James Watson)、弗(fu)朗(lang)西(xi)斯·克裏(li)克(Francis Crick)確定(ding)了DNA的雙螺(luo)旋結(jie)構。這(zhe)一突(tu)破(po)使科(ke)學家對DNA複(fu)製和細胞(bao)遺傳活動(dong)的理解(jie)取(qu)得重(zhong)大進(jin)展。

如何(he)評(ping)價(jia)DNA提取質量呢?
1. 紫外(wai)分光光度計
蛋(dan)白(bai)質的吸收(shou)峰在280 nm處(chu),是因為蛋白質(zhi)中的芳香(xiang)族氨基(ji)酸的存在。而核酸的比較(jiao)大吸收峰在260 nm左右(you),是由(you)於(yu)其嘌呤和嘧(mi)啶中存在共(gong)軛(e)雙(shuang)鍵。
當提取的DNA的A260/280在1.7-2.0之間,A260/230>1時,通常(chang)可(ke)以認(ren)為(wei)DNA質量比(bi)較高(gao),可以滿(man)足大部分的下遊(you)實驗。
2. 瓊(qiong)脂糖凝膠(jiao)電(dian)泳
另外通過瓊脂糖凝膠電泳(yong)進行檢測(ce),可以判(pan)斷(duan)提取的DNA是否是黄蜜柚免费版app下载所需(xu)要的目的基因,以及提(ti)取的核酸(suan)是否降解。質量比較好的基因組DNA的電泳條(tiao)帶(dai)應該(gai)是清晰(xi)明(ming)亮的單(dan)一條帶。

以下是DNA提取中經常會遇(yu)到的一些問(wen)題(ti):
DNA收率(lv)偏低(di)
首先要確保(bao)實驗是嚴(yan)格按(an)照(zhao)說明書進行操作的。
· 對於一些(xie)微生物(wu)含量低的樣本,可以增加樣本處理量或者(zhe)采(cai)用多(duo)個介(jie)質管處理(li)樣(yang)本後(hou)合並(bing)提取。
· 另(ling)外,對於使用渦旋儀或(huo)者一些動力(li)不足的研磨儀有可能會(hui)導致樣本研磨(mo)不(bu)充分。
· 也(ye)有一些樣本本(ben)身(shen)的細胞壁(bi)比較厚難裂(lie)解。對(dui)於這種(zhong)情況,可以在推薦的速(su)度和(he)時間基礎上增(zeng)加研(yan)磨次(ci)數(shu)。兩(liang)次研磨間將(jiang)介質管(guan)冰(bing)浴2 min。

DNA純(chun)度(du)偏(pian)低
· A260/280>2.0時,可能存在RNA的殘(can)留(liu),可通過瓊脂糖(tang)凝(ning)膠電泳來確認。可以在裂解後用RNase A Solution溶(rong)液(ye)孵育樣品5 min。
· A260/280<1.7時,有可能由於蛋白質或者汙(wu)染(ran)物未被完全(quan)去(qu)除(chu)。去雜(za)試(shi)劑需要在裂解液中充(chong)分混(hun)合,可以顛(dian)倒(dao)混勻或用*頭吹(chui)打混勻。將樣本置於冰上(shang)或者在冰箱(xiang)中放置5 min可進一步(bu)沉澱(dian)蛋白質。另外也可使(shi)用(yong)Wash Buffer充分洗滌兩次。
· A260/230<1.0時,同(tong)樣可能(neng)是由於蛋白質以及汙染物未被完(wan)全去除。另外如果(guo)提取過(guo)程(cheng)中有乙醇殘留,可以提高一次空(kong)離的離心(xin)速度,增加晾(liang)幹(gan)時間或者在55℃下進行烘幹。以上方(fang)法(fa)均可加(jia)速乙(yi)醇(chun)揮發。

DNA出現降(jiang)解
首(shou)先要確保樣本的新鮮程度以及保存條件(jian)。
· 采集(ji)的樣本如(ru)果不能立即(ji)進行實(shi)驗(yan),可以在-80℃中長期保存,避(bi)免反複凍融(rong)。樣本裂解時間過長(zhang)或者速度過大也有可能會導致(zhi)DNA的片(pian)段化。
· 對於大部分的樣本,FastPrep®儀器(qi)通(tong)常可以在6 m/s,40 s內完成樣本的處理,不會導致過度的裂解。
· 另外如果樣本過於複雜,裏麵(mian)的汙染物也可能會導致DNA的降解。對於這類樣本,可以在裂解前(qian)提前用PBS於4℃冰箱進行(xing)浸泡或者在裂解前加入終濃度0.2-0.5 M的EDTA。

DNA無(wu)法擴增 
· 調整DNA模(mo)板(ban)濃度:使用分光光(guang)度計測DNA濃度,高濃度DNA對PCR反(fan)應(ying)有抑(yi)製(zhi)作用。通過稀釋DNA模板減(jian)少(shao)洗脫的DNA中抑製劑(ji)對PCR反應的抑製。
· 優化(hua)PCR條件:優化(hua)反應條件或者檢查引物是否有問題
· 非特(te)異(yi)性(xing)條帶:洗脫液中的目的DNA豐(feng)度較低,如果樣品中微(wei)生(sheng)物的細胞壁較厚,需要(yao)適(shi)當增加研磨循環(huan)次數。

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