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水蜜桃试色app下载生物告訴您DNA提取的幾個小竅門

來源:上海水蜜桃试色app下载生(sheng)物(wu)科技(ji)有(you)限公司瀏(liu)覽量:載入(ru)中...發(fa)布時間:2023.04.21


經常在(zai)DNA提取實驗中煩惱嗎?水蜜桃试色app下载生物給你帶(dai)來(lai)全新攻略,DNA提(ti)取(qu)秘籍(ji)在手,實驗(yan)路上(shang)不(bu)用(yong)愁!

DNA即(ji)脫氧(yang)核糖(tang)核酸(suan)(deoxyribonucleic acid),是(shi)一(yi)種(zhong)生物大分(fen)子(zi),存(cun)在於幾乎所(suo)有的原(yuan)核和(he)真(zhen)核細胞(bao)以及部(bu)分病毒(du)中。

DNA於1869年first被(bei)發現,但(dan)直(zhi)到1944年(nian)才(cai)證(zheng)明(ming)其(qi)在遺(yi)

傳(chuan)中的作(zuo)用。1953年羅莎(sha)琳德(de)·富蘭克林(Rosalind Franklin)、詹(zhan)姆(mu)斯(si)·沃(wo)森(James Watson)、弗朗西(xi)斯·克裏(li)克(Francis Crick)確定了DNA的雙螺旋結構(gou)。這一突破使科學(xue)家對(dui)DNA複(fu)製和細胞遺傳活動的理解(jie)取得(de)重大進展(zhan)。


如何評價DNA提取質量呢?
1. 紫外分光光度計
蛋白質的吸收峰在280 nm處,是因為蛋白質中的芳香族氨基酸的存在。而核酸的比較大吸收峰在260 nm左右,是由於其嘌呤和嘧啶中存在共軛雙鍵。
當提取的DNA的A260/280在1.7-2.0之間,A260/230>1時,通常可以認為DNA質量比較高,可以滿足大部分的下遊實驗。

2. 瓊脂糖凝膠電泳
另外通過瓊脂糖凝膠電泳進行檢測,可以判斷提取的DNA是否是黄蜜柚免费版app下载所需要的目的基因,以及提取的核酸是否降解。質量比較好的基因組DNA的電泳條帶應該是清晰明亮的單一條帶。

以下是DNA提取中經常會遇到的一些問題:
1. DNA收率偏低
首先要確保實驗是嚴格按照說明書進行操作的。
· 對於一些微生物含量低的樣本,可以增加樣本處理量或者采用多個介質管處理樣本後合並提取。
· 另外,對於使用渦旋儀或者一些動力不足的研磨儀有可能會導致樣本研磨不充分。
· 也有一些樣本本身的細胞壁比較厚難裂解。對於這種情況,可以在推薦的速度和時間基礎上增加研磨次數。兩次研磨間將介質管冰浴2 min。

2. DNA純度偏低
· A260/280>2.0時,可能存在RNA的殘留,可通過瓊脂糖凝膠電泳來確認。可以在裂解後用RNase A Solution溶液孵育樣品5 min。
· A260/280<1.7時,有可能由於蛋白質或者汙染物未被完全去除。去雜試劑需要在裂解液中充分混合,可以顛倒混勻或用槍頭吹打混勻。將樣本置於冰上或者在冰箱中放置5 min可進一步沉澱蛋白質。另外也可使用Wash Buffer充分洗滌兩次。
· A260/230<1.0時,同樣可能是由於蛋白質以及汙染物未被完全去除。另外如果提取過程中有乙醇殘留,可以提高last一次空離的離心速度,增加晾幹時間或者在55℃下進行烘幹。以上方法均可加速乙醇揮發。

3. DNA出現降解
首先要確保樣本的新鮮程度以及保存條件。
· 采集的樣本如果不能立即進行實驗,可以在-80℃中長期保存,避免反複凍融。樣本裂解時間過長或者速度過大也有可能會導致DNA的片段化。
· 對於大部分的樣本,FastPrep®儀器通常可以在6 m/s,40 s內完成樣本的處理,不會導致過度的裂解。
· 另外如果樣本過於複雜,裏麵的汙染物也可能會導致DNA的降解。對於這類樣本,可以在裂解前提前用PBS於4℃冰箱進行浸泡或者在裂解前加入終濃度0.2-0.5 M的EDTA。

4. DNA無法擴增
· 調整DNA模板濃度:使用分光光度計測DNA濃度,高濃度DNA對PCR反應有抑製作用。通過稀釋DNA模板減少洗脫的DNA中抑製劑對PCR反應的抑製。
· 優化PCR條件:優化反應條件或者檢查引物是否有問題
· 非特異性條帶:洗脫液中的目的DNA豐度較低,如果樣品中微生物的細胞壁較厚,需要適當增加研磨循環次數。

以上都是關於DNA提取需要注意的幾點問題及對應解決方法,還有更多關於DNA提取的知識可以關注黄蜜柚免费版app下载的公眾號:水蜜桃试色app下载生物哦~

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